Afin de préserver et restaurer la fertilité de patients prépubères, des biopsies testiculaires sont congelées/décongelées et doivent être maturées afin de produire des spermatozoïdes pour l’assistance médicale à la procréation. La maturation in vitro développée chez la souris a un faible rendement. Les hormones stéroïdes jouant un rôle essentiel dans la spermatogenèse, il apparaît nécessaire de s’assurer que leur synthèse et leurs mécanismes d’action ne sont pas altérés dans les tissus cultivés in vitro. L’objectif était donc d’étudier la stéroïdogenèse et la signalisation des androgènes et des œstrogènes au cours de la maturation in vitro de tissus testiculaires de souris prépubères. Des analyses histologiques, RT-qPCR, Western blot et des mesures des taux de cholestérol et d’hormones stéroïdes ainsi que de l’activité aromatase ont été réalisées. Tout d’abord, un nombre similaire de cellules de Leydig (LC) est observé après 30 jours de culture organotypique (j30) et à 36,5 jours post-partum, le temps correspondant in vivo. Cependant, les LC sont partiellement matures in vitro avec une diminution des niveaux d’ARNm de Sult1e1 et Insl3 (marqueurs de LC adultes). Les niveaux d’ARNm de Cyp11a1, Cyp17a1 et Hsd17b3 codant pour les enzymes stéroïdogènes sont diminués in vitro. Une augmentation de la quantité de progestérone et une diminution des taux intra-testiculaires d’androstènedione sont observées à j30. De plus, la signalisation des androgènes est altérée à j30 avec une diminution des taux de transcrits de gènes cibles des androgènes. De même, l’expression et l’activité de l’aromatase et la signalisation des œstrogènes sont altérées à j30.