Dans la plupart des laboratoires, le gamma-hydroxy butyrate (GHB) est dosé par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CG-SM) après une étape d’extraction liquide/liquide suivi d’une dérivatisation. La chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (CL-SM/SM) permet également ce dosage avec une étape pré-analytique simplifiée, une simple défécation pouvant suffire. Néanmoins, les colonnes chromatographiques de type C18 utilisées quotidiennement en toxicologie n’apportent pas les conditions optimales de rétention du GHB, composé très polaire. La chromatographie convergente ultra performante (UPC2) est une technologie associant la chromatographie en phase supercritique (CPS) à la technologie de l’UPLC en fusionnant les avantages de la CG (faible viscosité) et ceux de la CL (fort pouvoir solubilisant). Les DBS sont de plus en plus utilisés en toxicologie: une goutte de sang séché suffit pour mener à bien des recherches larges, mais aussi des dosages. Le but de ce travail a été de développer un dosage simple, rapide et sensible de GHB sanguin sur DBS par CPS.

Un spot de sang séché de 10μL est directement placé dans un flacon d’injection. Au total, 10μL d’acide acétique à 4 %, 50μL de GHB-D6 et 300μL d’acétate d’éthyle y sont ajoutés puis l’ensemble est mélangé. Au total, 3μL sont injectés dans un ACQUITY UPC2 (Waters) couplé à un détecteur de masse simple quadripôle ACQUITY QDa (Waters). L’acquisition se fait en mode Single Ion Recording (SIR) en électrospray négatif. La phase stationnaire est une Torus Diol 1,7μm 3×75mm (Waters), la phase mobile est composée de CO₂/méthanol+0,1 % NH4OH en mode gradient. La durée d’une chromatographie est de 8min. Une gamme d’étalonnage est faite sur le même principe entre 0,5 et 100mg/L.

La méthode répond à tous les paramètres de validation du laboratoire avec notamment une limite de quantification de 1mg/L et une linéarité vérifiée jusque 250mg/L. La stabilité du GHB sur DBS sur une période 3 mois a été vérifiée.

Cette méthode est simple, rapide et de sensibilité suffisante. La CPS acceptant l’injection de solvants organiques, la phase pré-analytique se réalise directement dans le flacon d’injection, en quelques minutes. L’exposition au GHB, du fait de sa demi-vie d’élimination sanguine courte, est difficile à caractériser. La réalisation d’un prélèvement sur DBS est adaptée aux conditions de prise en charge médicales, notamment, lors de rassemblements festifs, ou à la réalisation de protocoles expérimentaux avec de multiples prélèvements. En perspective, le GHB étant présent dans la salive [Sergio Abanades. Clinical Trial Ther Drug Monit 2007;29(1):64–70], l’utilisation de spots de salives séchées pourrait devenir une alternative à la caractérisation d’une consommation récente volontaire ou à l’insu : cette approche est en cours d’évaluation ainsi que dans d’autres liquides biologiques (in vivo et post-mortem).