La sclérodermie systémique (SSc) est caractérisée par la production d’anticorps antinucléaires (ANA) qui pourraient être liés à un excès de cellules apoptotiques, en raison de l’altération des capacités d’efférocytose des macrophages chez les patients SSc. Les cellules du sang périphérique et la peau de patients SSc présentent une signature interferon (IFN). Le facteur de régulation de l’interféron IRF7, qui est exprimé dans la peau des patients SSc, interagit avec smad 3 et représente un lien entre l’inflammation et la fibrose dans la pathogenèse de la SSc. Cette signature est positivement corrélée aux manifestations cliniques sévères de la SSc. Le but de cette étude était de tester l’hypothèse qu’un inhibiteur de Janus Kinase, le Ruxolitinib (Ruxo) ciblant la signalisation IFN, pourrait améliorer l’efférocytose des macrophages pulmonaires ainsi que la fibrose cutanée et pulmonaire dans le modèle murin traité à la bléomycine.

In vitro : des monocytes différenciés en macrophage en présence de M-CSF à 50ng/ml pendant 6jours ont été traités à l’IFN-γ ou de l’IFN-β en présence ou non de 1μM de Ruxo et leurs capacités à phagocyter les cellules Jurkat apoptotiques marquées à la pHrodo ont ensuite été quantifiées par microscopie à fluorescence en temps réel. Des fibroblastes pulmonaires humains (FPH) isolés de biopsies de patients atteints de fibrose pulmonaire idiopathique (FPI), une autre maladie fibrosante partageant certaines similitudes avec la SSc, ont été traités ou non avec du TGF-β¹ng/ml) et du Ruxo pendant 24h. In vivo : Des souris mâles C57BL/6J âgées de huit semaines ont reçu des injections intradermiques de bléomycine (BLM) (0,4mg/kg dans 100μl) ou de NaCl et ont été exposées à un solvant ou à du Ruxo (20mg/kg, gavage oral deux fois/jour, 5jours/semaine). Après 4 semaines, des cellules Jurkat apoptotiques marquées au CFSE ont été instillées dans les poumons de souris anesthésiées et des lavages bronchoalvéolaires (LBA) ont été effectués pour évaluer les capacités d’efférocytose des macrophages alvéolaires (MA) (Gr1poset CD11bInt) par cytométrie en flux.

Les macrophages humains traités à l’IFN-γ ou à l’IFN-β présentent une diminution de la capacité d’efférocytose qui a été restaurée par le Ruxo. In vivo, le Ruxo diminue l’épaisseur dermique induite par la BLM. Une augmentation des cellules dermiques positives à la caspase-3 chez les souris traitées à la BLM par rapport au NaCl suggère un défaut d’élimination des cellules apoptotiques, c’est-à-dire de l’efferocytose. Les analyses histologiques pulmonaires ont révélé que la BLM induisait une désorganisation architecturale pulmonaire dans les zones sous-pleurales, intra parenchymateuses et péri-bronchiques qui était moins prononcée lors du traitement avec le Ruxo. Le pourcentage de MA positifs au CFSE était similaire entre les souris témoins et les souris exposées à la BLM, mais la moyenne de l’intensité de fluorescence du CFSE était plus faible chez les macrophages de souris exposées à la BLM, démontrant que les macrophages pulmonaires des souris exposées à la BLM avaient des capacités d’efférocytose altérées par rapport au groupe contrôle. Cependant, le Ruxo n’a pas amélioré les capacités d’efferocytose des MA suggérant que les propriétés anti-fibrosantes de cet inhibiteur de Jak ne sont pas directement liées à ses effets sur les propriétés pro-résolvantes des macrophages. Nous avons donc exploré les effets directs du Ruxo sur l’activation des fibroblastes pulmonaires humains et avons montré que le Ruxo réduisait l’expression de marqueurs fibroblastiques typiques activés par le TGF-β tels que Col4A2 et tendait à diminuer l’expression des gènes Col1A1 et Col3A1. De plus, le Ruxo tendait à diminuer l’expression du collagène, des protéines phospho-smad2 et phospho-smad3.

Nos résultats ont démontré que les MA dans le modèle de souris SSC-ILD induit par la BLM ont des capacités d’efférocytose altérées. Le Ruxo a amélioré l’épaisseur dermique et l’organisation architecturale pulmonaire dans ce modèle sans restaurer les capacités d’efférocytose des MA, ce qui suggère que les propriétés anti-fibrotiques du ruxolitinib étaient indépendantes de la résolution de l’inflammation lié à l’efférocytose. Ces propriétés anti-fibrosante du Ruxo peuvent être liées à son impact direct sur les fibroblastes. Néanmoins, au-delà de la fibrose, une efférocytose altérée peut participer aux premiers événements pro-inflammatoires dans le modèle murin de BLM.