Ces travaux décrivent une procédure d’extraction faisant appel aux sels QuEChERS et permettant une recherche et un dosage rapides de benzodiazépines pour des applications hospitalières et médico-légales. Les 43 molécules suivantes sont considérées : 24 benzodiazépines commercialisées, 10 de leurs métabolites, 8 benzodiazépines de synthèse (diclazépam, étizolam, deschloroétizolam, flubromazépam, flubromazolam, méclonazépam, clonazolam et nifoxipam) et la 2-amino-5-chloropyridine (ACP ; produit de dégradation de la zopiclone). Le protocole d’extraction est le suivant : à 100μL de matrice sont ajoutés 200μL d’acétonitrile et, après agitation au vortex et 10minutes au congélateur, environ 40mg de sels QuEChERS Mix I (4g MgSO₄, 1g NaCl, 0,5g Na₂H citrate 1,5 H₂O, 1g Na₃ citrate₂ H₂O) sont ajoutés. Après centrifugation pendant 10minutes à 13 000 tours/min, 50μL de surnageant sont dilués dans 150μL de phase mobile aqueuse, avant injection de 5μL dans le système LC–MS/MS. Le système chromatographique associe deux pompes UHPLC Nexera X2 LC-30AD, un four CTO-20AC, un passeur d’échantillons Nexera X2 SIL-30AC (Shimadzu, France) et une colonne Pinnacle DB PFPP (50mm×2,1mm et de granulométrie 1,9μm ; Restek^®). La détection est réalisée au moyen d’un spectromètre de masse en tandem 8050 (Shimadzu^®, France). Le temps d’acquisition est de 6,3min et une procédure de validation satisfaisant aux exigences de la norme ISO 15189 a été appliquée dans le sang total, le sérum et l’urine (à l’exception des 8 benzodiazépines de synthèse et de l’ACP). La méthode a été testée dans un échantillon de 50 patients. L’extraction de 6 points de gamme, 2 contrôles et 10 échantillons de patients, nécessitent 30 à 45minutes de préparation, permettant un rendu des résultats en moins de 3heures pour une telle série. Dans un contexte de toxicologie hospitalière, un résultat patient est rendu en moins d’une heure.

We report the development of an analytical procedure for the measurement of benzodiazepines, where the extraction step is based on QuEChERS salts, for application in clinical toxicology and forensic science. Forty-three benzodiazepines are considered : 24 commercialized compounds, 10 of their metabolites, 8 designer benzodiazepines and 2-amino-5-chloropyridine (ACP ; degradation product of zopiclone). The liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) system consists in a Pinnacle DB PFPP (50mm×2.1mm with particle size of 1.9μm ; Restek) column coupled with a 8050 MS system (Shimadzu^®, France). The whole procedure was validated according to ISO 15189 standard (except for the 8 designer benzodiazepines and ACP) and its performance was tested in the biological samples of 50 patients. About 30 to 45min are needed for the preparation of 10 patient samples, 2 internal quality controls and 6 points of calibration standards. This produces results in less than 3hours, which reduces to 1hour for a single patient.