Au cours de l’infection chronique par le virus de l’hépatite C (VHC), il existe des perturbations de l’homéostasie lymphocytaire B, responsables des complications auto-immunes et lymphoprolifératives associées. Notre équipe a récemment identifié au cours des vascularites cryoglobulinémiques associées au VHC une expansion clonale de lymphocytes B mémoire CD27+ IgM+ Igκ+ IgD−/low CD21−/low (LyB 21−). Ces LyB 21− ont un défaut de signalisation médié par le calcium, une absence de prolifération et d’activation en réponse à une stimulation par le récepteur B suggérant un état d’anergie. En revanche, ils peuvent être activés et proliférer après stimulation par le biais des toll like receptor (TLR). L’anergie est un mécanisme « classique » de régulation des cellules autoréactives circulantes. Cependant, le caractère autoréactif de ces lymphocytes B mémoire n’a jusqu’ici jamais pu être démontré dans les vascularites cryoglobulinémiques associées au VHC. Ces LyB 21− sont clonaux et expriment très majoritairement (>50 %) le réarrangement VH1-69 du domaine variable des chaînes lourdes d’immunoglobuline (IgH). Un tel degré de dominance clonale dans une sous-population lymphocytaire B est exceptionnel. L’objectif de ce projet est de caractériser la réactivité de la population clonale lymphocytaire B mémoire CD27+ IgM+ Igκ+ IgD−/low CD21−/low associée aux vascularites cryoglobulinémiques VHC+.

Les anticorps monoclonaux (mAb) isolés à partir de ces lymphocytes B mémoire IgM+ (LyB 21−) de 3 patients présentant une vascularites cryoglobulinémiques VHC+ active et non traitée, ont été clonés, produits puis testés en Elisa pour leur polyréactivité (anti-LPS, anti-insuline, anti-ADNsb, anti-ADNdb), leur réactivité contre les protéines du VHC et pour leur autoréactivité anti-Hep2, testée en Elisa et en immunofluorescence, et contre le fragment constant (Fc) des immunoglobulines G (IgG), testée en Elisa et en western blot.

Pour les 3 patients (P1, P2 et P3), l’analyse des gènes codant pour le domaine variable des IgH montre que la vaste majorité des LyB 21− appartient en réalité à une même famille clonale, exprimant respectivement le VH1-69 pour 100 % des LyB 21− de P1, le VH3-7 pour 96 % des LyB 21− de P2 et également le VH3-7 pour 98 % des LyB 21− de P3. Au total, 12 anticorps monoclonaux représentant les familles clonales observées chez les 3 patients, ont été produits et testés. Un seul mAb présentait une polyréactivité (8,3 %). Aucun des mAb ne présentaient de réactivité contre les protéines virales du VHC. Aucun des mAb ne présentaient d’autoréactivité anti-Hep-2. En revanche, les 12 mAb présentaient une réactivité contre le fragment Fc des IgG (100 %). L’intensité de cette réactivité anti-Fc semble corrélée à l’acquisition de mutations hypersomatiques.

Les anticorps monoclonaux produits à partir des lymphocytes B mémoire IgM+ de patients avec une vascularite cryoglobulinémique associée au VHC présentent une absence d’autoréactivité contre Hep-2, l’absence de polyréactivité, et l’absence de réactivité contre le VHC. En revanche, ces anticorps monoclonaux présentent une réactivité contre le fragment Fc des IgG qui semble dépendante du processus de maturation d’affinité.