La sclérodermie systémique (SSc) est une maladie auto-immune caractérisée par l’existence d’anticorps antinucléaires. Leur production peut être liée à un excès de cellules apoptotiques du fait d’une diminution de leur élimination par les macrophages lors d’un processus appelé efferocytose, dont l’altération participe à l’induction d’une auto-immunité. Par ailleurs, le niveau plasmatique et sérique de CXCL4, un nouveau biomarqueur de la SSc [1van Bon L., Affandi A.J., Broen J., Christmann R.B., Marijnissen R.J., Stawski L., y al. Proteome-wide analysis and CXCL4 as a biomarker in systemic sclerosis N Engl J Med 2014 ;  370 (5) : 433-443 [cross-ref]

Haga clic aquí para ir a la sección de Referencias], est corrélé à la sévérité de l’atteinte fibrosante de la maladie [2Lande R., Lee E.Y., Palazzo R., Marinari B., Pietraforte I., Santos G.S., y al. CXCL4 assembles DNA into liquid crystalline complexes to amplify TLR9-mediated interferon-α production in systemic sclerosis Nat Commun 2019 ;  10 (1) : 1731

Haga clic aquí para ir a la sección de Referencias]. Parce que les macrophages des patients SSc présentent un défaut d’efferocytose (Ballerie et al., 2019), et puisque CXCL4 peut induire un phénotype macrophagique M4 pro-inflammatoire et pro-fibrosant [3Gleissner C.A., Shaked I., Little K.M., Ley K. CXC chemokine ligand 4 induces a unique transcriptome in monocyte-derived macrophages J Immunol 2010 ;  184 (9) : 4810-4818 [cross-ref]

Haga clic aquí para ir a la sección de Referencias], nous avons émis l’hypothèse que CXCL4 pouvait moduler l’efferocytose des macrophages SSc. L’objectif de ce travail était de déterminer les capacités d’efferocytose des macrophages dérivés de monocytes humains différenciés par CXCL4, ainsi que la LC3-associated phagocytosis (LAP), un autre processus phagocytaire qui requiert des protéines de l’autophagie et qui participe au maintien d’un silence immunitaire. Enfin, chez deux modèles murins de SSc, nous avons déterminé les concentrations sériques en CXCL4 et évalué l’expression de marqueurs phénotypiques M4.

In vitro : les monocytes circulants issus de donneurs sains ont été différenciés en macrophages M4 en présence de M-CSF à 50ng/mL pendant 4 jours, puis en présence de CXCL4 recombinant à 1μmol/L pendant 2 jours supplémentaires. La phagocytose de billes fluorescentes et le niveau d’expression de récepteurs impliqués dans l’efferocytose ont été évalués par cytométrie en flux. L’efferocytose de lymphocytes Jurkat apoptotiques (Japo) et marqués par la sonde pHrodo a été mesurée par microscopie à fluorescence en temps réel. L’efferocytose de macrophages M0 exposés à du plasma de donneur sain ou bien de patient SSc a été mesurée par cytométrie en flux. Le flux autophagique, c’est-à-dire la quantité de vésicules autophagiques générées pendant un intervalle de temps donné, a été déterminé par cytométrie en flux en utilisant deux méthodes de détection de l’autophagie (sonde CYTO-ID et immunomarquage de la protéine LC3-II), dans des macrophages M0 et M4, ainsi que dans des macrophages SSc. La formation de LAPosomes a été observée par microscopie à fluorescence dans des macrophages M0 ou M4, exposés soit à des billes couplées à des IgG polyvalentes humaines induisant la LAP, soit à des Japo marqués par la sonde PKH67. In vivo : la concentration sérique en CXCL4 de deux modèles murins SSc, obtenus par injection intradermique de HOCl ou de Bléomycine, a été déterminée par ELISA, alors que l’expression des ARNm des marqueurs M4 était mesurée par RT-qPCR à partir des poumons des souris.

Les capacités d’efferocytose étaient significativement réduites dans les macrophages M4 lorsque comparés au phénotype M0. L’expression du récepteur efferocytaire CD36 était significativement réduite dans les macrophages M4, alors qu’on ne notait qu’une tendance à la diminution d’expression des récepteurs SR-B1 et MERTK. Les capacités de phagocytose des macrophages M4 étaient significativement réduites. Les macrophages M4 présentaient une tendance à la diminution du flux autophagique, qui est significativement diminué dans les macrophages de patients SSc, avec une réduction de la génération de vésicules autophagiques en comparaison aux macrophages M0. La proportion de LAPosomes observés en immunofluorescence était significativement augmentée dans les macrophages M4 après 45 minutes de phagocytose, suggérant un retard ou un défaut de fusion lysosomale permettant la dégradation de l’élément phagocyté au cours de la LAP. L’exposition au plasma de patient SSc diminuait significativement l’efferocytose des macrophages M0, et de manière plus marquée que le plasma de donneur sain. Chez la souris, on notait une augmentation significative de la concentration sérique en CXCL4 dans chacun des deux modèles en comparaison aux souris contrôle traitées par NaCl, et l’expression des ARNm des deux marqueurs M4 S100A8 et MMP7 était augmentée.

Nos résultats supportent une implication de la chimiokine CXCL4 dans l’altération des capacités d’efferocytose des macrophages des patients SSc ainsi que dans les modèles murins de la maladie.