La coloration de Gram qu’elle se fasse manuellement ou grâce à un colo-rateur est une étape incontournable mais aussi critique en bactériologie qui contribue à la fois au diagnostic clinique et à l’orientation thérapeutique. Il s’agit d’une méthode en portée A de type qualitatif.

L’objectif de ce travail est de contribuer à répondre aux exigences de la norme ISO15189 en termes de vérification des performances, d’harmonisation des pratiques professionnelles et d’évaluation des compétences en respectant le formalisme du document SH FORM 44. L’analyse des risques est décisive qu’elle se fasse selon la méthode des 5 M ou par l’analyse des modes de défaillance, de leurs effets et de leur criticité et doit aboutir à la mise en place de moyens cohérents de maîtrise adaptés à sa propre pratique. Sur site, l’étude des performances a consisté à évaluer la contamination entre échantillons (n=12, le bac de coloration et le carrousel du colorateur ne permettant pas de réaliser plus de 12 colorations de Gram simultanées) et à comparer la coloration manuelle versus la coloration automatisée sur système PREVI Color de bioMérieux, sur 20 échantillons de contrôles. Les critères d’acceptabilité ont porté sur la coloration (Gram positif, Gram négatif) et la morphologie observée (bacille ou cocci) de 4 souches de référence connues de la Collection de l’Institut Pasteur.

En pratique, si la compétence de l’utilisateur reste un point crucial à maîtriser, le biologiste doit aussi pleinement s’impliquer, les normes n’étant pas toujours adaptées, les recommandations des sociétés savantes et la bibliographie restant rares.

Gram staining manually made or in a automated way is an inescapable but also critical stage in bacteriology which contributes at the same time to the clinical dia-gnosis and to the therapeutic orientation. It is about a qualitative method in impact A.

The aim of this work is to contribute to meet the requirements of the standard ISO 15189 in terms of performances’check, harmonization of the profes-sional practises and evaluation of the skills/know-how by respecting the formalism of SH FORM 44. The risks’analysis is decisive that it makes according to the 5 M method or by the analysis of the failure modes, their effects and their criticality and has to end in the implementation of coherent means of control adapted to its own practice. On-site, the study of the performances consisted in estimating the contamination between samples (n=12, the stain dish and the carousel of the automated staining system allowing to realize no more than 12 Gram staining simultaneously) and to compare the manual Gram staining versus automated on system PREVI Color de BioMérieux, on 20 samples of controls. The cri-teria of acceptability concerned the staining (positive Gram, negative Gram) and the observed morphology (bacillus or cocci) of 4 reference bacteria known for the Collection of Institut Pasteur.

In practice, if the competence of the user stays a crucial point to be mastered, the biologist so completely has to get involved, the recommendations of the standards, the learned societies and the bibliography not being very numerous still and adapted to the microbiology.