La toxoplasmose est une infection critique chez la femme enceinte non prémunie et chez le sujet immunodéprimé. Toxoplasma gondii est un parasite Apicomplexe capable d'envahir presque toutes les cellules nucléées. Son développement intracellulaire est indispensable à sa croissance et à sa survie. L'étape cruciale de l'invasion cellulaire est encore assez mal connue. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés aux protéine kinases du parasite, et à leur rôle possible dans la transduction de signaux au cours de la phase d'internalisation cellulaire. Nous avons caractérisé des mitogen-activated protein kinases (MAPK) sur le plan biochimique et enzymatique. Deux MAPK de 47 et 43 kDa semblent être des homologues de MAPK de cellules eucaryotes supérieures de type ERK (extracellular signal-regulated kinase). Elles sont activables par le calcium et le phorbol-myristyl acétate et inhibées par le RO 31-8220, suggérant une activation via les proteine kinases C. De plus, l'inhibiteur PD98059 bloque l'activation de ces MAPK, suggérant qu'une kinase de type MEK (MAPK kinase) est impliquée dans la phosphorylation des résidus tyrosine et thréonine nécessaire à leur activation. Enfin, nous avons montré qu'il existe une relation entre l'activation ou l'inhibition de ces MAPK parasitaires et l'augmentation ou l'inhibition, respectivement, de l'invasion par le toxoplasme de cellules 3T3 en culture. Ces résultats semblent indiquer que des MAPK de type ERK jouent un rôle dans l'infectivité de T. gondii .

Toxoplasmosis is still a big concern in Public Health in France, regarding two particular aspects: congenital toxoplasmosis and reactivated toxoplasmosis in immunodeficient patients. Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite, that can invade almost all nucleated cells. The invasion step has been widely studied, but its accurate mechanism and the cell receptor remain largely unknown. In this work, we have attempted to investigate the role of kinases and signal transduction in the host cell penetration. We characterized mitogen-activated protein kinases (MAPK). in the parasite itself by immunoblotting, immunofluorescence, and determination of enzymatic activity. In particular, we identified two proteins of 43 and 47kDa, that could be homologues of extracellular signal-regulated kinases (ERK), i.e. ERK2 and ERK1, respectively. These parasite MAPK are activated by calcium and phorbol-myristyl acetate and inhibited by RO 31-8220, suggesting an activation through protein kinases C (PKC). Indeed the MAPK kinase (=MEK) inhibitor PD98059 inhibits the activation of parasite MAPK, suggesting that a MEK homologue could be responsible for the dual phosphorylation of MAPK on tyrosine and threonine residues, necessary for their activation. Finally, we demonstrated that activation or inhibition of parasite MAPK by preincubation of parasites with various activators or inhibitors led to an increased or reduced host cell invasion in vitro by parasites, respectively. All these results are in favour of a role of ERK-type parasite kinases in T. gondii infectivity in vitro .