P1036 Détection in situ des interactions entre la mitochondrie et le réticulum endoplasmique par proximity ligation assay : rôle potentiel d’une altération de ces interactions dans l’insulino résistance hépatique - 10/04/13
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Résumé |
Introduction |
Les mitochondries et le réticulum endoplasmique (RE) interagissent au niveau de points de contacts, appelés « mitochondria-associated membranes » (MAM), afin d’échanger du Ca2+ via le complexe protéique VDAC1/Grp75/IP3R1 et maintenir l’homéostasie énergétique. Le rôle d’une altération des MAM dans les désordres métaboliques est actuellement méconnu à cause du manque de technique quantitative pour les détecter. Le but de notre étude était de valider la détection in situ des interactions mitochondrie-RE par proximity ligation assay (PLA), et de déterminer leurs rôles dans l’insulinorésistance hépatique (IRH).
Matériels et méthodes |
Nous avons appliqué la technique d’in situ PLA pour visualiser et quantifier la proximité entre les protéines du complexe VDAC/Grp75/IP3R1, au niveau des MAM. Nous avons validé la méthode sur des cellules HuH7 en mesurant les interactions VDAC1/IP3R1 ou Grp75/IP3R1, suite à l’invalidation ou la surexpression de certaines protéines des MAM (VDAC1 et/ou Grp75). Le rôle des MAM dans l’IRH a ensuite été étudié en mesurant les interactions mitochondrie-RE dans des modèles murin et humain d’IR.
Résultats |
Nous démontrons que le complexe VDAC1/Grp75/IP3R1 peut être visualisé par in situ PLA dans les cellules HuH7. L’invalidation de VDAC1 ou Grp75 par ARNi (25nM, 48 heures) diminue les interactions entre VDAC1/IP3R1 (- 100 % et - 50 %, respectivement, p<0,05) et Grp75/IP3R1 (- 40 % et - 60 %, respectivement, p<0,05) alors que la surexpression de Grp75 (2 μg, 48 heures) les augmentent (VDAC1/IP3R1 : +63 % et Grp75/IP3R1 : +77 %, p<0,05). Enfin, nous démontrons que les interactions VDAC1/IP3R1 sont altérées dans des hépatocytes de souris rendues diabétiques par une diète riche en lipide (- 40 %, p<0,05) et dans des hépatocytes humains (- 35 %, p<0,05) dont l’IR a été induite par une inhibition de la cyclophilin D par la NIM811 (- 31 %, p<0,05).
Conclusion |
Nos résultats valident la technique d’in situ PLA pour visualiser et quantifier les interactions mitochondrie-RE dans les cellules, et suggèrent un rôle des MAM dans l’insulino-résistance hépatique.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.
Vol 39 - N° S1
P. A94 - mars 2013 Retour au numéro
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