Radio-immunodosage en milieu liquide pour la détection et la quantification de l'antigène p24 du virus de l'immunodéficience humaine type 1 dans le sérum - 18/12/07
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Résumé |
Parmi les dosages du VIH, le moins coûteux et approprie pour les pays aux ressources financières limitées le Forum for collaborative HIV Research; April 22, 2002 Washington DC a choisi le dosage du VIH après dissociation des complexes immuns par la chaleur. Ce dosage développé par Jorg Schupbach est plus sensible que le dosage standard de l'antigène p24 utilisé comme marqueur viral précoce dans le traitement du VIH. L'absence dans notre pays d'un test local simple et robuste, pour la détection et la quantification de l'antigène p24, contraste avec la volonté du Programme national de lutte contre le VIH/sida (PNLS) de faciliter l'accès au traitement antirétroviral à la grande majorité de personnes vivant avec le VIH. C'est pour combler cette lacune que le Commissariat général de l'énergie atomique (CGEA), Centre régional d'études nucléaires de Kinshasa (CREN-K) ont développé le test appelé «CGEACRENK HIV-1 p24 RIA» qui est une transposition de l'Elisa conventionnel vers le RIA à cause de la grande sensibilité du traceur radioactif. L'iode radioactif, incorporé aux anticorps monoclonaux pour être utilisé comme traceur dans l'immunoanalyse dite immunoradiométrie (IRMA), autorise des limites de détections de l'ordre de fentomole, yeptomole et zeptomole. Dans ce travail, nous décrivons les caractéristiques analytiques de notre premier anticorps polyclonal produit chez le lapin, du second anticorps produit chez la chèvre et du traceur marqué à l'iode-125 par la méthode d'oxydation exhaustive à la chloramine-T.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Abstract |
Among the less costly viral assays that may be appropriate for resource-poor countries, the workshop steering committee (A meeting organized by the Forum for Collaborative HIV Research April 22, 2002 Washington, DC) selected the heat-denatured p24 assay for consideration at this meeting because of its advanced stage of development. Developed by Jörg Schüpbach (University of Zurich), this assay for HIV p24 antigen is more sensitive than the original p24 assay used as a viral marker in early clinical trials of HIV therapies. The assay uses heat denaturation in a conventional p24 antigen Elisa assay. Boiling for 5 minutes destroys antibody and preserves antigen. Our test called ØCGEACRENK HIV-p24 RIA" is a transposition of signal-amplification-boosted of head-denatured plasma Elisa (1) to a radioimmunoassay performed with in-house reagents. The radioimmunoassay technique is based on the competitive binding of the serum HIV-1 p24 and radiolabel recombinant p24 preparation. They compete for binding to an antibody specific present in a substoichiometric amount. Complex of radiolabeled and unlabeled p24 antigen were separated from unbound species by reaction with an anti-rabbit sheep immunoglobulin as second antibody (house made). The detection limit of p24 was 0.05 pg/ml with as little as 10 ul of serum. This paper describes, for the first time, the successful production of polyclonal antisera specific for HIV-1 p24 and the radio iodination of recombinant HIV-1 p24 using exhaustive chloramin-T oxidation and the development of a sensitive radioimmunoassay (RIA) for measuring HIV-1 p24 in serum.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Mots clés : Radio-immunodosage, Traceur radioactif, VIH-1antigène p24, Anticorps polyclonal
Keywords : HIV type 1 p24, Radioimmunoassay, Recombinant p24, Radio-iodination, Polyclonal antibody
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Vol 22 - N° 5
P. 339-341 - octobre 2007 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.
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