Nouveau test ultrarapide pour la détection de bactéries - 06/10/11
, T. Balloy a, S. Degorge a, D. Benallaoua a, L. Batellier a, F. Koskas b, E. Borsali a, C. Chaumeil a
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Résumé |
Introduction |
Les contrôles bactériologiques sont destinés à réduire les risques de transmission d’infections. Toutefois, les cultures nécessitent de 18 heures à 14 jours et peuvent être faussement négatifs pour des bactéries à croissance lente ou déficientes. L’objectif de ce travail a été de valider un outil pour améliorer les performances des tests bactériologiques.
Méthodes |
Ce test est basé sur la réaction de polymérisation en chaîne rapide ou fast real-time PCR (frt PCR). Les ADN extraits des échantillons contenant un contrôle interne sont introduits dans quatre tubes contenant les amorces et sondes. Le programme du thermocycleur est fixé à 1×à 95°C, dix minutes et 45×(15secondes à 95°C, huit secondes à 52°C) et dix secondes à 72°C.
Résultats |
La frt PCR détecte 0,01 UFC/μl (équivalent d’unité formatrice de colonies) de toutes les bactéries et identifie huit genres sans interférences potentielles de l’ADN bactérien de l’environnement ni des champignons et sans procédures additionnelles.
Discussion |
La frt PCR détecte toutes les bactéries et quantifie la charge des staphylocoques, streptocoques, corynebactéries, Entérobactéries, Haemophilus, Acinetobacter, Pseudomonas et Propionibacteriaceae.
Conclusion |
Les cultures ne peuvent être obtenus qu’après 24heures ou plus d’incubation alors que frt PCR réduit ce temps à 90minutes. Des séries plus importantes doivent être testées pour confirmer l’utilité de ce nouveau test.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Abstract |
Introduction |
Bacteriological testing is aimed to reduce the risk of transmission of infections. However, the detection of Bacteria by culture requires from 18hours to 14 days and may produce erroneous results for fastidious species. The goal of this work was to design and validate a new tool for bacterial testing.
Methods |
The test is based on the fast real-time PCR (frt PCR). The DNA extracted from samples containing internal controls are introduced into four tubes containing primers and probes for the frt PCR. The cycling program consists in 1×at 95°C for 10min and 45×(15s at 95°C, 8s) at 52°C and 10s at 72°C.
Results |
The frt PCR detects 0,01 CFU/μl of Bacteria and identifies eight Genera without interferences from the environment or from fungi and with no need for melting curve analysis or additional sequencing.
Discussion |
The frt PCR detects and quantifies Bacteria identifying and assessing the load of Staphylococci, Streptococci, Haemophilus, Pseudomonas, Enterobacteria, Acinetobacter, Propionibacteriacae and Corynebacteria.
Conclusion |
Cultures require at least 24hours but the new frt PCR reduces the time to 90minutes. Larger series of samples are necessary to confirm the usefulness of this new test for routine bacterial sterility controls.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Mots clés : Bactéries, Infections, Stérilité, Test rapide, Dispositifs médicaux, Contrôles microbiologiques, Diagnostic, PCR en temps réel
Keywords : Bacteria, Infection, Sterility testing, Rapid test, Medical devices, Diagnosis, Microbiological control, Real-time PCR
Plan
Vol 59 - N° 5
P. 248-255 - octobre 2011 Retour au numéro
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- Editorial Board
- Description and sources of contamination by Campylobacter spp. of river water destined for human consumption in Brittany, France
- M. Denis, B. Chidaine, M.-J. Laisney, F. Mégraud, P. Fravalo
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