The present study investigates the interaction of TLR4 and RAGE with their respective ligands as inducers of the inflammatory markers IL-6 and TNF-⍺. Also, the reactivity of peripheral blood mononuclear cells (PBMNC) from type 2 diabetic (T2D) patients and non-diabetic healthy controls (ND) were comparatively studied.

Concentrations of IL-6 and TNF-⍺ were measured by sandwich Elisa, using kits supplied by Assay Designs (Ann Arbor, MI, USA). PBMNC from T2D and ND were incubated in the presence or absence of LPS, anti-TLR4 or anti-RAGE for 72hours at 37°C under 5% CO₂. The final volume was adjusted to 300μL in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum. After incubation, the cells were centrifuged, the supernatant collected and the cytokines measured.

PBMNC from T2D were more sensitive to innate immune stimulation with LPS and monoclonal agonist anti-TLR4 than were cells from ND. The actions of LPS, anti-TLR4 and anti-RAGE potentiated the production of IL-6 and TNF-⍺ in both groups. The simultaneous activation of monoclonal anti-RAGE and anti-TLR4 suggests that both antibodies used different receptors on the cell surface, but converged on the same PBMNC signaling metabolic pathways. This simultaneous activation induced a higher production of IL-6 and TNF-⍺ in PBMNC from the T2D patients than from the ND subjects.

Our results clearly show an exacerbation of innate immunity in PBMNC with T2D that was possibly hyperglycaemia-induced. These data, when analyzed together, suggest the importance of innate immunity in the pathogenesis of T2D.

Cette étude avait pour objectif d’examiner l’interaction de TLR4 et RAGE avec leurs ligands respectifs comme inducteurs des marqueurs de l’inflammation, IL-6 et TNF-⍺. La réactivité des cellules mononucléées du sang périphérique de patients atteints de diabète de type 2 (DT2) a été comparée à celle de cellules mononucléées de témoins non-diabétiques (ND).

Les concentrations d’IL-6 et TNF-⍺ ont été mesurées par méthode Elisa. Les cellules mononucléées issues des DT2 et des témoins ND ont été incubées en présence ou en absence de LPS, d’anti-TLR4 et/ou d’anti-RAGE pendant 72heures à 37°C avec 5% de CO₂. Le volume final a été ajusté à 300μL avec DMEM supplémenté avec 10% de sérum de veau fœtal. Après incubation, les cellules ont été centrifugées, le surnageant récupéré et les cytokines ont été mesurées.

Les cellules mononucléées des DT2 étaient plus sensibles à la stimulation immunitaire par les LPS et l’agoniste monoclonal anti-TLR4 que les cellules des témoins ND. L’action des LPS, des anti-TLR4 ou anti-RAGE a potentialisé la production d’IL-6 et de TNF-⍺ dans les deux groupes. L’effet de l’activation simultanée par les anticorps monoclonaux anti-RAGE et anti-TLR4 suggère que si les deux anticorps ont utilisé différents accepteurs sur la surface de la cellule, leurs effets convergent vers les mêmes voies de signalisation métaboliques. Cette activation simultanée a induit une augmentation de la production d’IL-6 et TNF-⍺ plus importante dans les cellules mononucléées des diabétiques que celle observée dans les cellules des témoins ND.

Les résultats montrent clairement une augmentation de l’immunité innée dans les cellules mononucléées des DT2 PBMC, peut-être induite par l’hyperglycémie. Ces données suggèrent l’importance de l’immunité innée dans le diabète de type 2.