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Performances des différentes méthodes de détection de la résistance à l'oxacilline de souches atypiques de Staphylococcus aureus - 06/12/06

Doi : 10.1016/j.patbio.2006.07.012 
F. Hamdad , F. Donda, G. Laurans, B. Canarelli, F. Rousseau, M. Biendo, D. Thomas, F. Eb
Service de bactériologie-hygiène, CHU d'Amiens, France 

Auteur correspondant. Service de bactériologie-hygiène, CHU Nord, place Victor-Pauchet, 80054 Amiens cedex 01, France.

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Résumé

Plusieurs méthodes de détection de la résistance à la méticilline ont été utilisées pour l'étude de 85 souches de Staphylococcus aureus présentant un profil de résistance atypique. Parmi ces souches, 73 (8,3 % des S. aureus résistants à la méticilline) sont résistantes à l'oxacilline et sensibles aux aminosides (SA-SARM) et 12 (1,38 % des S. aureus sensibles à la méticilline) sont phénotypiquement sensibles à l'oxacilline mais résistantes à la kanamycine-tobramycine (KTR-SASM). Les méthodes utilisées sont la diffusion en gélose avec les disques d'oxacilline à 5 μg et de céfoxitine à 30 μg sur Mueller-Hinton (MH) avec ou sans NaCl (2 %) et incubation à 37 ou 30 °C pendant 24 et 48 heures respectivement, la détermination de la CMI de l'oxacilline par E-test sur MH avec et sans NaCl, la recherche de la PLP2a par Slidex MRSA Detection après induction avec un disque de céfoxitine et la détection du gène mecA par amplification génique. La détection de la résistance des souches SA-SARM avec l'oxacilline est plus sensible (100 %) sur MH hypersalé que MH incubé à 30 °C pendant 48 heures (97,3 %). Quelles que soit les conditions de culture, la céfoxitine a détecté la résistance à la méticilline de ces souches. La CMI de l'oxacilline varie de 2 à 128 mg/l. Ces souches possèdent le gène mecA et la PLP2a. Parmi les souches KTR-SASM, une est résistante à l'oxacilline par expression de la PLP2a et du gène mecA. Les diamètres d'inhibition des disques d'oxacilline et de céfoxitine sont supérieurs aux diamètres limites. Il s'agit d'une souche très hétérogène. La CMI de l'oxacilline de ces souches est inférieure ou égale à 2 mg/l.

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Abstract

Seventy-three of aminoglycoside-susceptible methicillin-resistant Staphylococcus aureus (AS-MRSA) and 12 kanamycin-tobramycin-resistant methicillin-susceptible S. aureus (KTR-MSSA) isolates were phenotypically and genotypically examined for methicillin susceptibility. The AS-MRSA profile represents 8.3% of MRSA strains and the KTR-MSSA profile represents 1.38% of MSSA strains. The diffusion method using the 5 μg oxacillin and 30 μg cefoxitin discs on Mueller-Hinton Agar (MHA) with and without NaCl, the incubation at 35 °C or 30 °C for 24 or 48 hours respectively, and the determining oxacillin MICs by E-test (AES, Combourg, France) were performed and used as phenotypic methods. We also used the mecA gene PCR which was considered as the “gold standard” for methicillin resistance detection, and the Slidex MRSA Detection (bioMérieux) that detect the presence of mecA gene product (PBP 2a). To increase the level of PBP 2a expression, the 30 μg cefoxitin disc was used as an inducer. All the AS-MRSA strains (100%) were detected by the cefoxitin disc in all conditions and by the oxacillin disc on MHA with 2% of NaCl at 35 °C. Without NaCl, the sensitivity fell to 97,2% by oxacillin disc. The oxacillin MICs for these isolates ranged from 2 to 128 mg/l. The mecA gene determinant and its product PBP 2a were detected in all AS-MRSA strains. All KTR-MSSA strains were phenotypically methicillin-susceptible and oxacillin MICs were below or borderline of breakpoint (≤2 mg/l). The mecA gene determinant and its product were detected in one strain which was considered to be the most heterogeneous of those tested.

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Mots clés : S. aureus, Résistance à la méticilline, Méthodes de détection, Profil de résistance atypique

Keywords : Oxacillin resistance, Methods detection, Atypic S. aureus strains


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Vol 54 - N° 8-9

P. 447-452 - octobre-novembre 2006 Retour au numéro
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