Si le rotavirus du groupe A est bien étudié sur le plan épidémiologique, les autres groupes sont peu étudiés, surtout en Tunisie. Le rôle des infections à rotavirus C (RVC) chez l’homme est sous-estimé à cause de la nature sporadique de l’apparition du virus. L’objectif de notre étude a été de construire un contrôle positif interne de reverse transcription PCR (RT-PCR), afin de pouvoir mettre à la disposition des laboratoires de diagnostic un outil de dépistage des RVC.

Le contrôle positif interne (386pb) a été construit à partir du gène 5 (1353pb) de la souche porcine de référence Cowden, cloné dans le baculovirus recombinant BacVP6C. Un fragment de 596pb a été amplifié par PCR de l’ADNdb de BacVP6C. Nous avons délété une partie centrale de 210pb, puis nous avons cloné le fragment de 386pb obtenu dans le plasmide pGEM-3Zf⁺ dans la région flanquée par les promoteurs de la SP6 et T7 ARN polymérase.

Le plasmide recombinant obtenu, nommé pIAM1 a été utilisé pour obtenir le contrôle positif interne par une transcription in vitro. La mise au point de la réaction de RT-PCR a été effectuée en faisant varier ses différents paramètres. La sensibilité de la détection a été déterminée, elle est de l’ordre de 3,66×10⁵ molécules d’ARN par microlitre.

L’emploi d’un contrôle positif dont la taille est réduite par rapport à la souche sauvage offre une grande spécificité de la RT-PCR et permet une surveillance complète et efficace des virus entérotransmissibles responsables des gastroentérites.

Unlike group A, a few studies have interested other groups of the rotavirus, especially in Tunisia. The role of rotavirus C (RVC) infection is underestimated because of its sporadic nature. The aim of our study was to develop rapid diagnostic procedures of RVC by using an internal positive control of reverse transcription PCR (RT-PCR).

The internal positive control (386pb) was designed from the recombinant baculovirus BacVP6C containing the full length cDNA of the Cowden strain gene 5 (1353pb). A fragment of 596pb was amplified by PCR using the BacVP6C DNA ds as template. Then, a central part of 210pb was deleted and the remaining fragment (386pb) was cloned into pGEM-3Zf⁺ plasmid between SP6 and T7 RNA polymerase promoters.

The obtained recombinant plasmid “pIAM1” was then used for the generation of the internal positive control by in vitro transcription. The sensibility of the RT-PCR was about 3.66×10⁵ molecules of RNA/μl.

The use of a shorter positive control, as compared to the wild type, allows increased specificity of the RT-PCR reaction, and could be used for efficient diagnostic and surveillance of RVC-caused diseases.