Caractérisation d'une protéase extracellulaire de Clostridium difficile - 01/01/04
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Résumé |
Clostridium difficile est une bactérie entéropathogènes dont les facteurs de virulence majeurs sont les toxines A et B. Cependant, d'autres structures ont été impliquées dans la colonisation du tractus digestif par cette bactérie, première étape de la pathogenèse. Outre des facteurs d'adhérence, C. difficile présente une activité protéolytique de surface qui pourrait jouer un rôle dans sa physiopathologie. L'objectif de ce travail était d'étudier une protéine dénommée Cwp84, qui présente des homologies significatives avec de nombreuses cystéines protéases. La partie catalytique de la protéine a été purifiée sous forme recombinante, après clonage du gène dans le vecteur d'expression pGEX-6P-1, en fusion avec le gène codant pour la glutathion-S-transférase. La fraction ainsi purifiée présente une activité protéolytique sur gélatine et sur BAPNA, substrat synthétique de protéase, mais n'a pas d'activité sur azocoll, ce qui témoigne d'une spécificité d'action étroite. Le profil d'inhibition de cette enzyme confirme son appartenance à la famille des cystéines protéases. Cwp84 pourrait intervenir soit dans la dégradation de certaines molécules spécifiques des tissus de l'hôte, soit dans la maturation de certaines protéines de surface de C. difficile.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Abstract |
Clostridium difficile is an intestinal pathogen, which produces two main virulence factors, the exotoxins A and B. Other bacterial structures have been implicated in the colonization of the gastrointestinal tract, which is the first step of the pathogenic process. C. difficile expresses adherence factors and also, displays some surface-associated proteolytic activity, which could play a role in the physiopathology of this bacterium. The aim of this work was to study the protein named Cwp84 which displays significant homologies with many cysteine proteases. The coding catalytic domain of this protein has been cloned in the expression system pGEX-6P-1, as an in-frame fusion with the gluthatione S-transferase, and subsequently purified. The purified fraction showed proteolytic activity on gelatine and BAPNA, but not on azocoll, suggesting a highly selective substrate specificity. The results obtained from inhibition experiments confirmed that Cwp84 belongs to the cysteine protease family. Cwp84 could play a role in degrading some specific host proteins or in the maturation of surface-associated bacterial proteins.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Mots clés : Clostridium difficile, Cystéine protéase, Protéines de surface, Purification de protéine, BAPNA, Inhibiteurs de protéases
Keywords : Clostridium difficile, Cysteine protease, Surface proteins, Protein purification, BAPNA, Protease inhibitors
Plan
Vol 52 - N° 8
P. 444-449 - octobre 2004 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.
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