Évaluer la cinétique de la croissance des cellules épithéliales limbiques in vitro à partir d’explants limbiques prélevés sur des greffons conservés en organoculture.

Vingt et un explants limbiques prélevés sur les collerettes cornéosclérales de greffons cornéens humains conservés en organoculture pendant 18 à 24 jours ont été cultivées à 37°C pendant dix, 13 ou 18 jours. La surface du voile cellulaire a été mesurée pendant la culture à l’aide d’un logiciel. En fin de culture, les cellules dissociées ont été comptées et analysées en immunoperoxydase.

La courbe de la surface du voile cellulaire (S) en fonction de la durée de culture (t) est décrite au mieux par un modèle polynomial d’équation S=0,024t³−0,038t²−0,044t+0,092. La durée moyenne du cycle cellulaire est de 24 heures. La croissance cellulaire est d’autant plus grande que le délai post-mortem de prélèvement du donneur est court. La plupart des cellules expriment la cytokératine-3 (expression variable d’une cellule à l’autre). Plus de 50 % des cellules expriment la vimentine.

Le limbe prélevé sur un greffon cornéen humain conservé en organoculture pendant trois semaines conserve un potentiel de prolifération cellulaire compatible avec une utilisation thérapeutique pour une allogreffe de limbe ou une thérapie cellulaire épithéliale cornéenne allogénique. Le potentiel de croissance des cellules épithéliales limbiques est cependant altéré par l’ischémie froide post-mortem du donneur et le délai post-mortem de prélèvement des cornées doit donc être aussi court que possible.

To assess limbal epithelial cell growth kinetics in vitro using tissue retrieved from organ-cultured donor corneas.

Twenty-one limbal explants were retrieved from corneoscleral rims of donor corneal grafts preserved for 18–24 days in organ culture. The explants were cultured at 37°C for 10, 13, or 18 days. The epithelial cell sheet area was measured during culture by means of morphometry. At the end of culture, the dissociated cells were counted and analyzed by immunocytochemistry.

The curve of the epithelial cell sheet area (S) in relation to culture time (t) was best fitted by a polynomial model (S=0.024t³−0.038t²−0.044t+0.092). The average duration of the cell cycle was 24h. Cell growth decreased as donor tissue retrieval postmortem time increased. Cultured cells featured various expressions of cytokeratin-3 ranging from absent (few cells) to strong. More than 50% of cells expressed vimentin.

Limbal tissue retrieved from donor tissue that was organ-cultured for 3 weeks maintains a potential for cell renewal and growth compatible with clinical use for limbal allograft transplantation or cultured stem cell transplantation. However, cell growth potential is impaired by donor postmortem ischemia, which implies that tissue must be retrieved as soon as possible after donor death.