Des techniques de détection sensibles, rapides et spécifiques sont indispensables au diagnostic de la toxoplasmose chez les patients immunodéprimés ou en cas d’atteinte fœtale. Les objectifs de ce travail étaient de mettre au point une technique de diagnostic moléculaire appliquée à Toxoplasma gondii par PCR en temps réel avec contrôle interne compétitif et, par ailleurs, d’évaluer la fréquence des réactivations toxoplasmiques dans une population de patients allogreffés.

Des amorces et une sonde Taqman spécifiques de la séquence répétée de 529 pb ont été sélectionnées. Un contrôle interne d’amplification a été construit par clonage d’un fragment d’Arabidopsis thaliana. Une deuxième sonde Taqman, spécifique du contrôle interne, a été choisie et testée. La répétabilité et la reproductibilité de notre technique ont été évaluées. Une étude a alors été réalisée sur des patients allogreffés de moelle osseuse du service d’hématologie clinique de l’Hôtel-Dieu de Clermont-Ferrand. Des prélèvements de sang total ont été analysés de façon hebdomadaire puis bimensuelle (à partir de j100) pendant les six premiers mois postgreffe.

Sur une période de 12 mois, 451 échantillons provenant de 40 patients ont été testés. Sur ces 40 patients, 25 avaient à la fois une sérologie toxoplasmose positive et une chimioprophylaxie antitoxoplasmique adéquate. Un prélèvement issu d’un de ces 25 patients était positif, ce qui porte le taux de réactivation dans cette population à risque à 4 %.

Un suivi hebdomadaire systématique par PCR Toxoplasma gondii de tous les patients allogreffés semble excessif, mais est indispensable chez les patients ne pouvant pas recevoir de prophylaxie adéquate.

A sensitive, rapid and specific diagnostic method is essential for the diagnosis of toxoplasmosis in immunocompromised hosts or in congenital infection. We report the development of a real-time PCR assay for quantitative diagnosis of toxoplasmosis with competitive internal amplification control. This PCR was applied after allogeneic stem cell transplantation to estimate the frequency of reactivation.

Primers and Taqman probe (FAM-BHQ1) were designed to amplify the 529bp element of T. gondii. The internal amplification control was developed by cloning a fragment of Arabidopsis thaliana DNA flanked by sequences specific for T. gondii 529bp element. A Taqman probe specific for the competitive internal control was designed and tested (YY-BHQ1). We determined the repeatability and reproducibility of the method. A prospective study was performed on adults who received an allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. After transplantation, patients were monitored once per week during the first 100 days; they were then monitored once every 2 weeks until day 180 after transplantation (i.e., day +180).

A total of 451 samples from 40 patients were tested. Twenty-five patients had both positive toxoplasmosis serology and an adequate chemoprophylaxis. One sample from one patient was found positive. The rate of reactivation in the population of this study is 4%.

A monitoring by T. gondii PCR should be realized weekly for patients receiving an allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, without an adequate chemoprophylaxis.