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Microbilles, nanobilles et cytométrie : applications à l'analyse et à la purification cellulaire et moléculaire - 01/01/03

Doi : 10.1016/S0369-8114(03)00127-5 

G.  Lizard a * ,  L.  Duvillard a ,  N.  Wedemeyer b ,  C.  Muller c ,  F.  Ghiringhelli d ,  A.  Cesbron e ,  P.  Poncelet f ,  F.  Gallet g ,  E.  Kahn h ,  P.  Gambert a ,  W.  Göhde i *Auteur correspondant.

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Résumé

Les nanobilles et les microbilles sont des outils importants en cytométrie. Les microbilles ont d'abord été utilisées pour optimiser les signaux de diffraction et de fluorescence analysés par cytométrie en flux ainsi que pour évaluer la phagocytose. Couplées de façon covalente à des anticorps, les nanobilles ont servi à révéler des antigènes cellulaires. Actuellement, des microbilles particulières permettent de quantifier de manière absolue des sites antigéniques. Par ailleurs, les nanobilles et les microbilles magnétiques constituent un outil important de purification cellulaire et moléculaire. Les méthodes analytiques faisant appel aux microbilles se sont étendues à la détection de protéines, d'acides nucléiques et d'ions. Pour cela, des microbilles de fluorescences différentes sont couplées à des anticorps, des oligonucléotides ou des chélatants. Les applications de ces méthodes multiplexées qui permettent l'identification et la quantification simultanée de plusieurs ions ou macromolécules concernent aussi l'identification d'activités enzymatiques et les analyses de polymorphisme. Avec les microbilles utilisées comme support réactionnel, les domaines d'application de la cytométrie en flux vont ainsi de l'analyse cellulaire à l'analyse moléculaire. Les microbilles sont aussi utilisées comme outil de calibration en microscopie confocale mais aussi pour la micromanipulation d'objets biologiques à l'échelle cellulaire ou moléculaire. Des innovations méthodologiques importantes associées aux nano et aux microbilles sont prévisibles en biologie, médecine, agro-alimentaire et environnement.

Mots clés  : Microbilles ; Nanobilles ; Quantification ; Tri ; Analyse multiplexée ; Cytométrie.

Abstract

Nano and microspheres are important tools in cytometry. They have been used in first to optimize fluorescent signals detected by flow cytometry and to evaluate phagocytosis. Some antigens were also detected by using nanospheres covalently coupled to antibodies. Specifically dedicated microspheres are now widely used for antigenic quantitation by flow cytometry, and magnetic nano and micropheres are very usefull for cellular and molecular purifications. To date, analytical methods based on the use of microspheres are developed to detect proteins, nucleic acids, and ions. To this end, antibodies, oligonucleotides, or chelating agents are bound to microspheres characterized by different fluorescences. The applications of these multiplexed microspheres assays allow to identify and quantify simultaneously some macromolecules and ions, but they also permit to analyze enzymatic activities and to perform polymorphism analyses. With microspheres used as reactive support, molecular analyses are therefore possible by flow cytometry. Nano and microspheres are also usefull tools for calibration in confocal microscopy as well as for micromanipulations of biomolecules and of living cells. Inovative methods based on the use of nano and microspheres are expected in the fields of biology, medicine, food industry, and environmental sciences.

Mots clés  : Microspheres ; Nanospheres ; Quantification ; Purification ; Multiplexed analysis ; Cytometry.

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© 2003  Publié par Elsevier Masson SAS.

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Vol 51 - N° 7

P. 418-427 - septembre 2003 Retour au numéro
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  • Cytométrie en flux, nanobilles et microbilles : vers l'émergence de techniques multiplexées prometteuses pour l'établissement de profils moléculaires à partir de petits échantillons
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  • Journée thématique AFC (Association française de cytométrie) - microbilles et cytométrie

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