Un variant inédit (p.Lys25 *) dans le gène SUPT20H a été identifié dans une forme familiale de polyarthrite rhumatoïde (PR). Le gène SUPT20H code pour une protéine dont la fonction est mal connue, possiblement impliquée dans l’autophagie, le stress du réticulum endoplasmique, la régulation transcriptionnelle et le cycle cellulaire. Ce projet visait à étudier les expressions géniques et protéiques de SUPT20H et des protéines interagissant avec SUPT20H au cours de la différenciation in vitro en macrophages et en ostéoclastes.

Nous avons travaillé avec les lignées cellulaires monoblastique humaine U937 et murine RAW264.7. Les cellules U937 ont été différenciées en macrophages sur 3jours avec le phorbol myristate acetate. Les cellules RAW264.7 ont été différenciées en ostéoclastes sur 9jours avec le RANKL et le M-CSF. La localisation cellulaire de SUPT20H a été étudiée par immunofluorescence en microscopie confocale. Nous avons quantifié par qRT-PCR l’expression de l’ARNm de SUPT20H, p38/MAPK14, CDKN1A/p21 et GCN5, pendant la différenciation en macrophages et en ostéoclastes. L’ARNm a été extrait des lysats cellulaires tous les jours suivant l’induction d’une différenciation en macrophages et en ostéoclastes. Des Western blots ont permis de quantifier les protéines SUPT20H, p38/MAPK14 et GCN5. L’analyse des variables continues a été effectuée par des tests ANOVA suivis de post-tests de Tuckey ou en régression linéaire, en utilisant GrAP–HPad prism. Une valeur p<0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

L’immunofluorescence a montré que la protéine SUPT20H était principalement localisée dans le noyau des précurseurs macrophagiques et ostéoclastiques et se maintenait dans le noyau tout au long de la différenciation. Au cours de la différenciation en macrophages, on a observé une diminution significative de l’ARNm de SUPT20H (p=0,04), p38/MAPK14 (p=0,0003), et GCN5 (p<0,0001) et une variation non significative de CDKN1A/p21 (p=0,09). Au cours de la différenciation en ostéoclastes, on a observé une diminution significative de l’ARNm de SUPT20H (p=0,01), une tendance à la baisse de GCN5 (p=0,06), une variation non significative de CDKN1A/p21 (p=0,49), et p38/MAPK14 (p=0,12). Concernant les expressions protéiques lors de la différenciation macrophagique, on a observé une baisse non significative de SUPT20H (p=0,21), une baisse significative de GCN5 (p=0,04) et une variation non significative de p38/MAPK14 (p=0,17). Au cours de la différenciation ostéoclastique, une tendance à la baisse de l’expression protéique de SUPT20H (p=0,07) et une baisse significative de GCN5 (p=0,02) et p38/MAPK14 (p=0,04) ont été observées.

La localisation nucléaire supporte la fonction prédite de SUPT20H dans la régulation transcriptionnelle. Les baisses d’expressions génique et protéique de SUPT20H et des protéines interagissant avec SUPT20H lors de la différenciation des deux types cellulaires devront être mises en perspective avec leurs fonctions (phosphorylation, kinase).

La protéine SUPT20H agirait sur la régulation transcriptionnelle et exercerait un effet régulateur négatif sur la différenciation en macrophages et en ostéoclastes. Ces données supportent un rôle de SUPT20H dans la pathogénie de la PR.