An LNA-based loss-of-function assay for micro-RNAs - 21/04/08
, M. Ameyar-Zazoua, N. Nonne, A. Polesskaya, S. Ait-Si-Ali, R. Groisman, M. Souidi, L.L. Pritchard, A. Harel-Bellan
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Abstract |
MicroRNAs (miRNAs) have recently emerged as being essential for development and for the control of cell proliferation/differentiation in various organisms. However, little is known about miRNA function and mode of action at the cellular level. We have designed a miRNA loss-of-function assay, based on chemically modified locked nucleic acids (LNA) antisense oligonucleotides and usable in tissue culture cells. We show that LNA/DNA mixed oligonucleotides form highly stable duplexes with miRNAs in vitro. Ex vivo, the target miRNA becomes undetectable in cells transfected with the antisense oligonucleotide. The effect is dose-dependent, long-lasting, and specific. Moreover, using a reporter assay, we show that antisense LNA/DNA oligonucleotides inhibit short non-coding RNAs at the functional level. Thus LNA/DNA mixmers represent powerful tools for functional analysis of miRNAs.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Keywords : Micro-RNAs, Antisense, Locked nucleic acid (LNA)
Abbreviations : miRNA, LNA, nt, siRNA, RISC, miRNP
Plan
Vol 60 - N° 9
P. 633-638 - novembre 2006 Retour au numéro
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