The basic objective of this study is to propose a short, reliable, mass compatible ultra-performance liquid chromatography (UPLC) method to confirm the identity of impurities and to estimate the assay and purity of Tirofiban simultaneously in aqueous injection (5mg/100mL bag). Aqueous formulations are susceptible to oxidation, hence the possible oxidative degradation impurities of Tirofiban were studied in this experiment by using UPLC coupled with photodiode array/Quadrupole Dalton Analyzer (PDA/QDa) detectors. The required separations were achieved in the column: ACQUITY HSS T3 (100×2.1) mm, 1.7μm, operated at 30°C by using 0.02% Triethyl amine (TEA) in water, pH 2.8 with formic acid as solution-A and 0.1% formic acid in 9:1 acetonitrile, water as solution-B. Binary gradient flow is delivered at the rate of 0.5mL/min and the detection of impurities specifically carried out at 227nm using empower3 software. RP-UPLC/PDA with QDa detector was used for the experiment. The method was linear and accurate from the concentrations: 0.04 to 0.38μg/mL for impurity-A and 0.04 to 75μg/mL for Tirofiban. The major unknown degradation impurity generated during the oxidative degradation has been identified as N-oxide derivative (Impurity-B) [(M+H)⁺ 455.1] by using QDa detector operated in an electro spray positive ion mode by applying a voltage of 0.8kV. This method was further validated as per ICH Q2 (R2) guidelines. Hence, the proposed method is said to be a fast, sensitive and comprehensive technique, which could give a clear idea about the assay and impurity profile of Tirofiban injection.

L’objectif de base de cette étude est de proposer une méthode de chromatographie liquide ultra-performance (UPLC) courte, fiable et compatible avec la masse pour confirmer l’identité des impuretés et estimer simultanément le dosage et la pureté du Tirofiban en injection aqueuse (sac de 5mg/100mL). Les formulations aqueuses sont sensibles à l’oxydation, c’est pourquoi les impuretés de dégradation oxydative possibles du Tirofiban ont été étudiées dans cette expérience en utilisant l’UPLC couplé à des détecteurs Photodiode Array/Quadrupole Dalton Analyzer (PDA/QDa). Les séparations requises ont été réalisées dans la colonne : ACQUITY HSS T3 (100×2,1)mm, 1,7μm, fonctionné à 30°C en utilisant 0,02 % de triéthylamine (TEA) dans l’eau, pH 2,8 avec de l’acide formique comme solution-A et 0,1 % acide formique dans l’acétonitrile 9:1, eau sous forme de solution-B. Le débit à gradient binaire est délivré à la vitesse de 0,5mL/min et la détection des impuretés est spécifiquement réalisée à 227nm à l’aide du logiciel empower3. RP-UPLC/PDA avec détecteur QDa a été utilisé pour l’expérience. La méthode était linéaire et précise à partir des concentrations : 0,04 à 0,38μg/mL pour l’impureté-A et 0,04 à 75μg/mL pour le Tirofiban. La principale impureté de dégradation inconnue générée pendant la dégradation oxydatif a été identifiée comme un dérivé N-oxyde (Impureté-B) [(M+H)⁺ 455,1] en utilisant un détecteur QDa fonctionnant en mode ion positif par électropulvérisation en appliquant une tension de 0,8kV. Cette méthode a ensuite été validée conformément aux directives ICH Q2 (R2). Par conséquent, la méthode proposée est considérée comme une technique rapide, sensible et complète qui pourrait donner une idée claire du dosage et du profil d’impureté de l’injection de Tirofiban.