Dosage des stéroïdes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem avec préparation automatisée de l’échantillon - 30/09/20
, T. Pereira b, F. Ziegler, Dr c, V. Brunel, Dr a
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Résumé |
Objectif La spectrométrie de masse (LC-MS/MS) est la méthode de référence pour l’analyse des stéroïdes sériques. Elle nécessite une préparation manuelle et une extraction liquide-liquide ou sur phase solide. L’objectif du travail est de valider une méthode de dosage de testostérone, delta-4 androstènedione, 17-OH-progestérone, 11-désoxycortisol et DHEA avec une préparation automatisée de l’échantillon.
Matériel et méthodes |
Le système analytique comprend le spectromètre de masse LCMS 8060 (Shimadzu) et une chaîne HPLC Nexera X2 couplée au préparateur d’échantillons CLAM-2030. Le dosage nécessite 30μL de sérum. La séparation chromatographique est réalisée sur une colonne type Biphényl. La méthode a été validée par les critères suivants : précision, linéarité, dilution, spécificité, stabilité, effet matrice, comparaison de méthodes avec la RIA.
Résultats |
Les temps de préparation et d’analyse varient de 6 à 13min avec des temps de rétention de 5 à 7min. Les CV de répétabilité et de reproductibilité ne dépassent pas 8,4 % et 6,3 %. Une bonne concordance avec la RIA est observée pour la testostérone chez l’homme et la 17-OHP, il existe un biais moyen de −20 % pour la testostérone chez la femme et l’enfant et de −31 % pour la delta-4 androstènedione.
Discussion |
La préparation automatisée montre des performances analytiques similaires aux études précédentes [2, 1]. Elle permet de réduire le volume de sérum nécessaire et un gain de temps pour le rendu du résultat.
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Vol 81 - N° 4
P. 236 - septembre 2020 Retour au numéro
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