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AMÉLIORATION D’UNE TECHNIQUE DE DÉPISTAGE DE L’HÉMOGLOBINURIE PAROXYSTIQUE NOCTURNE EN CYTOMÉTRIE EN FLUX - 31/03/08

Doi : RFL-11-2006-00-386-50834-101019-200601440 

Pierre Moncharmont [1],

Janine Bernaud [1],

Annick Raffin [1],

Dominique Rigal [1]

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L’hémoglobinurie paroxystique nocturne (HPN) se traduit par un déficit d’une ou plusieurs des protéines régulatrices du complément sur les érythrocytes favorisant l’hémolyse. Le test au sucrose et l’étude en cytométrie en flux de 3 marqueurs, les CD55, CD58 et CD59 ont été employés pour détecter un clone déficitaire. Afin d’optimiser cette recherche, une technique avec lavages automatisés des érythrocytes avant marquage par l’anticorps anti-CD59, un des marqueurs les plus informatifs, a été évaluée. Sur 126 patients, 117 ont été trouvés négatifs dans toutes les techniques. Chez 9 patients avec un clone déficitaire, 16 prélèvements ont été analysés. Avec le test au sucrose, 5 sont positifs, 1 est douteux et 10 négatifs, dont 8 avec un clone déficitaire inférieur ou égal à 3 %. Un déficit a été retrouvé avec les deux techniques en cytométrie en flux pour le CD59. Cependant, sur 12 des 16 prélèvements évalués, le pourcentage d’hématies CD59 négatif observé est plus important avec la nouvelle technique, entre 0,25 % et 7,00 %, que celui obtenu avec la technique classique. Le test de dépistage avec lavages automatisés des hématies détecte mieux la présence d’un clone CD59 déficitaire.

Improvement of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria screening in flow cytometry analysis

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) presents a deficiency of proteins that modulate the complement on red blood cells (RBC) and enhances hemolysis. Sucrose hemolysis test and study by flow cytometry of 3 markers CD55, CD58 and CD59 were performed to detect a defective RBC clone. In order to optimize the screening, a new technique including automated washing of RBC before labelling with the anti-CD 59 antibody, one of the most informative markers, was evaluated. Of 126 patients, 117 were found negative whatever the technique. In the 9 patients with a defective clone, 16 samples were studied. With the sucrose hemolysis test, 5 were positive, 1 doubtful and 10 negative even with 8 of which being with a defective clone lower or equal to 3%. For the CD59, a deficiency was found with the both flow cytometry techniques. However, the percentage of CD59 negative RBC appeared greater with the new technique, between 0.25 and 7.00%, compared to the standard one. The screening test performed with automated washing of RBC allows a better detection of a defective CD59 clone.


Mots clés : Hémoglobinurie paroxystique nocturne , cytométrie en flux , CD59

Keywords: Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria , flow cytometry , CD59


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Vol 36 - N° 386

P. 41-44 - novembre 2006 Retour au numéro
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