Développement, validation et implémentation en routine d’une méthode de criblage de drogues et médicaments à partir d’un micro-prélèvement de sang sur papier buvard (DBS) en utilisant la spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) couplée à la chromatographie liquide ultra haute-performance (UHPLC).

Une méthode UHPLC-HRMS a été développée pour l’analyse de DBS. Pour ce faire, deux spots de 10μL de sang complet ont été dopés avec 142 standards représentatifs des substances trouvées dans des cas cliniques et de suspicion de consommation de drogues et médicaments au volant (MDV). La méthode est basée sur une acquisition en mode full-scan en ionisation positive suivi d’une fragmentation en données dépendantes (DDA) basée sur une liste d’inclusion de 1008 composés, incluant notamment des nouvelles substances psychoactives (NPS). Au cours de la même analyse, une acquisition ciblée (Tsim) en ionisation négative est réalisée sur l’ion [M-H]⁻ du 11-nor-9-carboxy-delta-9-tetrahydrocannabinol (THC-COOH). La méthode a été évaluée par validation croisée en comparant les substances détectées dans 94 cas MDV avec les résultats de deux autres approches actuellement utilisées en routine [2Versace F., et al. Automated DBS extraction prior to Hilic/RP LC-M/MS target sreening of drugs Chromatographia 2013 ;  76 : 1281-1293 [cross-ref]

Cliquez ici pour aller à la section Références, 1Viette V., et al. Current role of liquid chromatography coupled to mass spectrometry in clinical toxicology screening methods Clin Chem Lab Med 2011 ;  49 : 1091-1103

Cliquez ici pour aller à la section Références] pour répondre aux demandes cliniques et forensiques.

La méthode développée a permis la détection de l’ensemble des 142 substances représentatives. Les limites d’identification (LOIs) ont été déterminées sur un échantillon de 30 substances. Celles-ci ont été mesurées comme étant égales ou inférieures à 20ng/mL, malgré le faible volume de sang utilisé. La méthode a également été évaluée grâce à l’utilisation de contrôles de qualité externes. La comparaison de 94 cas entre la méthode HRMS développée, une méthode ciblée commerciale pour la toxicologie clinique (Bruker Toxtyper™)[1Viette V., et al. Current role of liquid chromatography coupled to mass spectrometry in clinical toxicology screening methods Clin Chem Lab Med 2011 ;  49 : 1091-1103

Cliquez ici pour aller à la section Références] appliquée après extraction liquide-liquide sur 0,5ml de sang complet, ainsi qu’une méthode ciblée développée sur un système QTrap pour l’analyse de DBS a permis de confirmer l’intérêt de l’approche HRMS. Au total, 271 identifications de 79 substances différentes ont été effectuées. La méthode HRMS développée dans ce projet a montré des meilleurs résultats, en identifiant 98,9 % de la totalité des substances contre 71,6 % pour l’approche Toxtyper et 56,8 % pour l’approche QTrap. Le THC-COOH a été détecté dans 50 % des cas mesurés et est le principal responsable de ce gain de performance obtenue grâce à l’approche HRMS, confirmant ainsi la nécessité d’implémenter cette substance dans les approches de criblage.

Le récent développement des appareils HRMS amenant un gain de sensibilité permet d’utiliser le DBS comme micro-prélèvement pour le screening toxicologique large échelle.