Résistance d’Aspergillus fumigatus aux triazolés : comparaison de méthodes de détection phénotypique et génotypique - 16/09/17
Résumé |
Introduction/objectif |
L’émergence d’isolats cliniques d’Aspergillus fumigatus résistants (R) aux antifongiques triazolés a motivé le développement de méthodes moléculaires de screening in vitro de la résistance, alternatives aux tests phénotypiques (CMI) non réalisables en l’absence de culture positive. Des PCR multiplexes en temps réel permettent la détection simultanée du champignon et de mutations majeures du gène cyp51A, cible des azolés. L’objectif de cette étude était d’évaluer une trousse commerciale (MycoGENIE®, AdemTech) détectant A. fumigatus et la mutation TR34/L98H dans des prélèvements respiratoires, par rapport à la détermination de CMI sur souches isolées en culture.
Matériels et méthodes |
L’évaluation a porté sur 60 LBA de patients à risque d’aspergillose invasive (AI) réalisés entre 2012 et 2015, et 125 expectorations de patients atteints de mucoviscidose, suivis au CHU de Rennes, prélevées entre décembre 2015 et mai 2016. Une culture mycologique a également été réalisée. Lorsqu’A. fumigatus était isolé, les CMI du voriconazole (VRC) et de l’itraconazole (ITC) ont été déterminées par Etest® (BioMérieux). Pour les souches « R » à l’ITC et/ou au VRC (CMI>2mg/L), la CMI du posaconazole (POS) a été déterminée et le gène du cyp51A a été séquencé.
Résultats |
Les 15 souches d’A. fumigatus isolées de LBA étaient sensibles in vitro aux azolés testés. Cinq des 41 isolats d’expectorations étaient R (12,2 %) : multi-R (n=2/5), R VRC-ITC (n=1/5) ou R ITC-POS (n=2/5). Le séquençage a mis en évidence une mutation du cyp51A pour 3 des 5 souches R : TR34/L98H (n=1), M220K (n=1) et G54R (n=1). La PCR A. fumigatus était positive pour 36/60 LBA (60 %) et 65/125 (52 %) des expectorations. Sur ces 101 échantillons évaluables, aucune amplification de la cible TR34/L98H n’a été observée, y compris dans l’expectoration d’où la souche mutée avait été isolée.
Conclusion |
La prévalence de la résistance est élevée chez les patients atteints de mucoviscidose mais encore faible dans la population à risque d’AI. Avec une sensibilité supérieure à celle de la culture, MycoGENIE® apporte un bénéfice pour le diagnostic d’AI. Cependant, la détection de résistance est limitée à une seule mutation, et sa sensibilité restreinte du fait de la présence d’une copie unique du cyp51A par génome d’Aspergillus. Avec la limite du nombre restreint d’isolats dans cette série, les bandelettes Etest® restent actuellement indispensables pour détecter la résistance en routine.
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Vol 27 - N° 3
P. e3-e4 - septembre 2017 Retour au numéro
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