Le développement des techniques de génotypage basées sur l’amplification génique permet de prédire la présence ou l’absence d’antigènes de groupes sanguins à la surface des globules rouges. Ces techniques s’avèrent utiles lorsque les méthodes sérologiques sont inenvisageables. C’est le cas quand un patient a été récemment transfusé ou encore si l’on constate une saturation des globules rouges par des autoanticorps. Le génotypage moléculaire avec l’avènement de la PCR en temps réel limite le risque de contamination d’amplicons d’ADN inter échantillons car sans manipulation post-PCR. Au-delà de cet aspect primordial, la nouvelle génération d’automates permet d’obtenir les résultats de génotypage en moins de 45minutes. Pour répondre à l’urgence transfusionnelle, nous avons développé au laboratoire IHM de l’EFS IdF un protocole d’urgence de génotypage courant des antigènes de groupes sanguins. Ce protocole est composé de deux étapes : la première consiste à extraire l’ADN génomique en moins de 5minutes à température ambiante en mettant en présence 2μL de sang total avec une solution dénaturante ; la deuxième étape est basée sur l’amplification et la discrimination allèlique en point final (PCR en temps réel par sondes d’hydrolyses) des cibles moléculaires FY*1/*2, FY*Fy, JK*1/*2, MNS*3/*4, UvarP2, UvarNY. Nous avons validé ce protocole sur des ADNg extraits à partir de patients atteints de différentes pathologies démontrant ainsi la robustesse et la fiabilité de la technologie PCR en temps réel par sondes d’hydrolyses. Afin d’être réactifs devant l’urgence, des plaques de 96 puits sont préparées avec le mélange réactionnel et conservé à −20°C.