This study is an evaluation of a fluorometric test using alamar Blue reagent in the performance of drug screening tests for Candida spp. and hyphal forms of Aspergillus fumigatus .

After standardization of the alamar Blue method, the reference antifungal drugs, amphotericin B, fluconazole, 5-fluorocytosine and itraconazole were used to assess the alamar Blue screening test compared to the reference microdilution methods recommended by the National Committee for Clinical Laboratory Standard and to a spectrophotometric method using a tetrazolium salt. Application was illustrated with new azole compounds and natural extracts.

The standardization of the fluorometric method allowed us to define testing conditions for Candida spp. and for Aspergillus fumigatus in terms of inoculum quantity, incubation time, fluorescent indicator volume and contact time. This method led to minimum inhibitory concentrations (MIC) in good agreement with those obtained by the National Committee for Clinical Laboratory Standard reference methods for amphotericin B, fluconazole and 5-fluorocytosine on Candida spp., and also for amphotericin B and itraconazole on Aspergillus fumigatus . Furthermore, applied to our research activities, the test allowed the selection of one imidazolylindol propanol compound with a MIC of 0.001 µg/mL on Candida albicans . In conclusion this study demonstrated that our alamar Blue method was suitable for antifungal drug screening.

Cette étude a pour but d'évaluer un test utilisant le Bleu alamar pour le criblage de substances potentiellement actives sur Candida spp. et sur la forme filamenteuse d' Aspergillus fumigatus .

Après standardisation de la méthode utilisant le Bleu alamar, des molécules de référence, amphotéricine B, fluconazole, 5-fluorocytosine et itraconazole sont utilisées pour évaluer le test de criblage utilisant l'alamar Blue en le comparant aux méthodes de microdilutions de référence préconisées par le National Committee for Clinical Laboratory Standard et à une méthode spectrophotométrique utilisant un sel de tetrazolium. Ce test de criblage est appliqué à de nouveaux composés azolés et à des extraits d'origine naturelle.

La standardisation de la technique fluorimétrique nous a permis de définir les conditions opératoires pour les tests de criblage sur Candida spp. et sur Aspergillus fumigatus en terme de taille d'inoculum, de temps d'incubation, de volume et de temps de contact de l'indicateur fluorescent. Cette méthode donne des valeurs de concentrations minimales inhibitrices (CMI) comparables à celles obtenues avec la méthode de référence du National Committee for Clinical Laboratory Standard pour l'amphotéricine B, le fluconazole et la 5-fluorocytosine sur Candida spp., mais aussi pour l'amphotéricine B et l'itraconazole sur Aspergillus fumigatus . De plus, appliqué en routine dans notre activité de recherche, ce test a permis de sélectionner un composé imidazolylindol-propanol dont la CMI est de 0,001 µg/mL sur Candida albicans . En conclusion, cette étude démontre que le test alamar Blue est approprié pour le criblage de nouvelles molécules potentiellement antifongiques.