P165 Implication de l’interaction entre la NO synthase neuronale et de son inhibiteur protéique endogène PIN dans le contrôle de la sécrétion d’insuline normale et pathologique - 10/04/12
Résumé |
Introduction |
Nous avons précédemment démontré que la NO synthase neuronale (nNOS) contrôle la sécrétion d’insuline grâce à des activités métaboliques et non métaboliques. Cette dernière est liée à l’interaction de la nNOS avec son inhibiteur PIN, également chaîne légère de la myosine V, au niveau des granules d’insuline. Nous souhaitons déterminer si l’interaction nNOS-PIN module la sécrétion d’insuline et est altérée dans des situations d’hypersécrétion d’insuline comme chez le rat Zucker fa/fa.
Matériels et méthodes |
Le complexe nNOS/PIN/myosine V a été étudié par co-immunoprécipitation sur la lignée INS-1. L’interaction nNOS-PIN a été analysée par la méthode Spot et par immunofluorescence. La sécrétion d’insuline a été mesurée sur les cellules INS-1 et des îlots de rats Zucker fa/fa et fa/+.
Résultats |
Dans la lignée INS-1, nous avons montré une interaction directe entre la nNOS, PIN et la myosine V ainsi qu’une augmentation du complexe ternaire lorsque PIN est surexprimé. Après analyse des régions de la nNOS impliquées dans l’interaction avec PIN, nous avons pu identifier un peptide mutant qui inhibe l’interaction nNOS-PIN avec un Ki de 0,4μM. Ce peptide (20μm), conjugué à la séquence TAT du virus HIV, dissocie l’interaction nNOS-PIN de 47 % dans la lignée INS-1 et diminue de 36 % (p<0,01) la sécrétion d’insuline sous 5,6mM et 8,3mM de glucose et de 28 % (p<0,05) sous 2,8mM de glucose. Dans les cellules β de rat Zucker fa/fa, nous observons par immunofluorescence une augmentation de l’interaction entre la nNOS/PIN/myosine V. De plus, le peptide (40μM) restaure une sécrétion d’insuline induite par 2,8, 5,6 et 11,2mM glucose (p<0,05) similaire à celle observée chez les rats contrôles fa/+.
Conclusion |
Nos résultats démontrent le rôle du complexe nNOS-PIN dans la modulation de la sécrétion d’insuline, probablement au niveau de l’exocytose.
Le texte complet de cet article est disponible en PDF.Vol 38 - N° S2
P. A70 - mars 2012 Retour au numéroBienvenue sur EM-consulte, la référence des professionnels de santé.