More than 300 red blood cell (RBC) antigens belonging to 36 blood group systems have been officially reported in humans by the International Society of Blood Transfusion (ISBT). Phenotypic variability is directly linked to the expression of the 41 blood group genes. The Rh blood group system, which is composed of 54 antigens, is the most complex and polymorphic system. Many rare genetic variants within the RH (RHD and RHCE) genes, involving various mutational mechanisms (single-nucleotide substitutions, short insertions/deletions, rearrangements, large deletions), have been reported in the literature and reference databases. Expression of the variants induces variable clinical outcomes depending on their nature and impact on antigen structure. Their respective molecular and cellular effects remain however poorly studied. Biological resources to conduct this research are also barely available. We have paid a specific attention to three different classes of single-nucleotide substitutions: 1/ splice site variants in the Rh, Kell, Kidd, Junior and Langereis systems by the minigene splicing assay developed locally; 2/ missense variants in the RhD protein and their effect on intermolecular interaction with its protein partner RhAG, intracellular trafficking and plasma membrane integration; and 3/ synonymous variants in the RHD gene. Overall not only this project has fundamental objectives by analyzing the functional effect of variants in order to make genotype–phenotype correlation, but the aim is also to develop/engineer molecular tools and cell models to carry out those studies.

Plus de 300 antigènes érythrocytaires appartenant à 36 systèmes sanguins sont actuellement répertoriés officiellement chez l’Homme par l’International Society of Blood Transfusion (ISBT). La variabilité phénotypique observée est directement liée à l’expression de 41 gènes. Le système Rh, qui comporte à ce jour 54 antigènes, est le plus complexe et le plus polymorphe. De très nombreux variants génétiques rares dans les gènes RH (RHD et RHCE) impliquant divers mécanismes mutationnels (substitutions nucléotidiques, courtes insertions/délétions, réarrangements, grandes délétions) ont été rapportés dans la littérature et les bases de données de référence. Ces variants ont des conséquences cliniques variables en fonction de leur nature et de leur effet sur l’expression antigénique. Cependant leur interprétation fonctionnelle respective reste peu étudiée d’un point de vue moléculaire et cellulaire. D’autre part, les ressources biologiques sont souvent insuffisantes ou indisponibles pour caractériser spécifiquement leur effet. Nous nous intéressons spécifiquement à trois types de variations : 1/ les variants d’épissage des systèmes Rh, Kell, Kidd, Junior et Langereis par l’approche « minigène » développée au laboratoire ; 2/ les variants faux-sens de la protéine RhD et leur effet sur les interactions intermoléculaires avec son partenaire protéique RhAG, le trafic intracellulaire et l’intégration du complexe dans la membrane plasmique ; et 3/ les variants silencieux du gène RHD. Ce projet porte donc à la fois des objectifs fondamentaux, par l’étude de l’impact fonctionnel des variants dans le but de déterminer les corrélations génotype–phénotype ; et appliqués, par le développement d’outils méthodologiques nécessaires à l’étude de ces variants.